最新公告： 2008年8月17日，壳寡糖与人类健康高端论坛暨格莱克壳寡糖研究中心学术年会在中国科学院大连化学物理研究所礼堂隆重召开。学会领导，国际国内权威专家，国内外知名企业家以及新闻媒体等300人受邀出席了会议  
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壳寡糖抑制肿瘤作用的研究（中）
时间：2008-10-18 15:46:10 来源：山东科尔生物医药科技开发有限公司 作者： 【关闭】

1.2.9 抑制肿瘤细胞生长的检测方法采MTT（四唑蓝）法：
    实验重复两次，每组实验设平行孔，壳寡糖给药组剂量分别为 1mg/ml，400μg/ml，100μg/ml，10μg/ml，贴壁细胞于实验前一天铺板，悬浮细胞于实验当天处理。每孔细胞数为1x105，终体积为1ml。阳性对照药物顺铂浓度为10μg /ml。加药后培养72小时，加MTT及溶解液，于595nm比色测定，并根据吸光度计算抑制率。
1.2.10 排染法检测壳寡糖对HCa-F的抑制率
    分别在第3、6、24小时取各孔的细胞悬液50微升于载玻片上，再加台酚蓝染液50微升，混匀后在显微镜下观察。核蓝染的为死细胞。抑制率=死细胞数/细胞总数×100%。
结果
一 不同寡聚糖对Sarcima-180癌细胞的抑制作用
    用寡聚糖进行抑瘤试验，筛选抑瘤作用较强的寡聚糖，结果表明:壳寡糖C-III-2的抑瘤率远高于甘露寡糖和磺化甘露寡糖,壳寡糖的三个处理中，浓度较低的,抑瘤率较高,达到99.5%（见表1）。
表1. 不同寡聚糖对S-180的抑瘤率
样品             用量                抑瘤率
               （mg/mL）              （%）
                          5                  59.5
甘露寡糖            2.5                60.5
                        1.5                12.9
                         5                  18.8
磺化甘露寡糖       2.5                 32.6
                         1.5                 34.8
                         9.5                 90.5
壳寡糖               7.1                  98.5
                        4.7                  99.5
二 壳聚糖不同批次对S-180肿瘤细胞的抑制作用
    用体外抑瘤方法对壳寡糖不同批次进行快速筛选，结果表明：3种不同制备工艺的壳寡糖中对癌细胞DNA合成的抑制作用效果最好的是C-III-2，三个浓度的抑制率均达到90%以上（见表2）。故随后的抑瘤试验样品均选用壳寡糖（C-III-2）。
       表2 壳聚糖不同批次对S-180肿瘤细胞DNA合成的抑制作用
壳寡糖样品       浓度          抑制率       平均
（批次）       （mg/ml）        （%）      （%）
                     48.3           99.8
C-III-2          4.83           97.4        98.5
                    0.48           98.2
                    52.3           87.5
C-II-2           5.23           81.3        82.8
                    0.52           79.7
                    47.6           13.3
C-I-2            4.76           13.5        23.5
                    0.46           43.7
三 壳寡糖（C-III-2）抑瘤作用的动物试验
    1 壳寡糖对腹水瘤小鼠生存时间的影响
    由表3可见，小鼠接种肿瘤后，与对照组比较，环磷酰胺阳性对照组生存时间延长37%（p＜0.01)；低、中、高剂量组生存时间分别延长16%（p＜0.05)，34%（p＜0.01)，35%（p＜0.001)。
表3  口服壳寡糖30天对H22腹水瘤小鼠生存时间的影响
组别         剂量           动物数         生存时间         P值
          （mL/kg.bw）   （只）          （天）
空白对照组       0          12         11.9±2.2           ——
低剂量组        3.3         12         13.8±2.0*         0.0338
中剂量组        6.7         12         15.9±3.6**        0.0338
高剂量组       20.0         12         16.1±1.5***       1.6×10-5
阳性对照组       0          12         16.3±2.6***       0.0002
    *： 差异显著性（p＜0.05＝， **：差异非常显著性（p＜0.01＝，***：差异极显著性（p＜0.001＝
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